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重组葡激酶的高效表达与纯化
通过发酵和纯化条件的研究,建立适合重组葡激酶工程菌的发酵和纯化工艺.对重组葡激酶工程菌发酵过程中的pH、饱和氧浓度、补料以及诱导时间进行考察,获得该工程菌的.高效表达条件.在此条件下,重组葡激酶表达水平在50%以上,并以活性可溶性状态存在于细胞内;经渗滤,超滤浓缩、透析,DEAE-Sepharose FF层析和Sp-Sepharose FF层析后,经SDS-PAGE和HPLC分析,纯度达到99%.在还原条件下进行SDS-PAGE分析,测得该酶相对分子质量为15.5kD,等电聚焦显示其等电点为8.4.
作 者：卢锦 霍蕾 田天丽 徐非一 刘玉应 孙启玲 LU Jin HUO Lei TIAN Tian-li XU Fei-yi LIU Yu-ying SUN Qi-ling 作者单位：四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,成都,610064 刊 名：四川大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)： 43(6) 分类号：Q5 关键词：重组葡激酶 工艺优化 高效表达重组酶Cre基因在大肠杆菌中的高效表达及其一步纯化和活性检测
为了实现DNA重组酶Cre在体外的应用,以pET-30a高效表达载体为基础构建了pTE30-Cre质粒.将此质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导的Cre基因的`高效表达.对表达出的Cre重组酶蛋白进行镍离子鳌合法一步纯化,并以带有两个同向loxP位点的质粒为底物,对纯化出的Cre酶进行活性检测.该实验为Cre酶的体外应用奠定了基础.
作 者：王文棋 盖颖 陆海 蒋湘宁 WANG Wen-qi GAI Ying LU Hai JIANG Xiang-ning 作者单位：北京林业大学生物科学与技术学院 刊 名：北京林业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF BEIJING FORESTRY UNIVERSITY 年，卷(期)：2006 28(3) 分类号：Q559+.1 关键词：DNA重组酶Cre pET30-Cre高效表达 一步纯化 Cre酶活性检测基因重组BDNF蛋白在大肠杆菌中的表达纯化与功能鉴定
目的 构建脑源性神经营养因子(BDNF)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,以获取高产量、低成本、高纯度且具有生物学活性的BDNF蛋白.方法 以人的全长BDNFcDNA为模板,用PCR方法扩增成熟区BDNF的cDNA,应用基因重组技术将人BDNF cDNA克隆到质粒pET-30a(+)中,进行限制性内切酶酶切分析和DNA测序鉴定.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)LysS,经IPTG诱导表达后,用Ni-NTA亲和层析纯化获取蛋白,用SDS-PAGE和western blot方法鉴另,噻唑蓝(MTT)法检测重组蛋白对PC12细胞增殖的.影响. 结果 扩增出的人BDNF cDNA片段克隆进了原核表达载体,经酶切和核酸测序鉴定,得到了正确的重组质粒pET-BDNF,并在大肠杆菌中获得了表达.纯化后的蛋白经考马氏亮蓝染色呈单一条带;用抗BDNF的抗体进行western blot分析证明目的蛋白获得了表达.基因重组BDNF蛋白能够促进PC12细胞增殖.结论 本研究成功构建了表达基因重组人BDNF的原核表达载体,基因重组人BDNF蛋白在大肠杆菌中获得了表达和纯化,所获得的基因重组蛋白具有较好的生物学活性.
作 者：马蕾蕾 苏丹 季爱民 MA Lei-lei SU Dan JI Ai-min 作者单位：510282,广州,南方医科大学珠江医院新药研发中心 刊 名：中华神经医学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF NEUROMEDICINE 年，卷(期)： 5(11) 分类号：Q5 关键词：脑源性神经营养因子 大肠杆菌 蛋白表达 蛋白纯化 生物学活性重组人甲状旁腺激素肽(1-34)在大肠杆菌中的高效融合表达及纯化
人工合成人甲状旁腺激素1～34肽段(PTH1-34)的cDNA序列,克隆到大肠杆菌蛋白表达载体pThioHis中,获得了高表达菌株.经发酵、破菌、金属螯合层析、反相层析和凝胶层析后获得了纯度大于95%的hPTH1-34,hPTH1-34肽N端测序和质谱分子量测定结果与天然PTH1-34一致.生物学活性研究表明,hPTH1-34在体外具有刺激腺苷酸环化酶的作用.
作 者：李健峰 肖红剑 姬秋彦 李智华 龙海亭 阎玲梅 罗娜 徐维明 LI Jian-feng XIAO Hong-jian JI Qiu-yan LI Zhi-hua LONG Hai-ting YAN Ling-mei LUO Na XU Wei-ming 作者单位：中国医学科学院,中国协和医科大学医学生物学研究所,昆明,650118 刊 名：中国生物工程杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2006 26(3) 分类号：Q81 关键词：人甲状旁腺激素 大肠杆菌 融合表达