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甘油对毕赤酵母高密度发酵表达重组水蛭素Ⅱ的影响
目的:考察甘油对毕赤酵母生长和重组水蛭素Ⅱ表达的影响.方法:在摇瓶和10L发酵罐中用含有不同浓度甘油的培养基培养毕赤酵母,测定毕赤酵母的.生长和重组水蛭素Ⅱ的表达.结果:发酵培养基中初始甘油浓度为5g/L时,毕赤酵母生长速度明显加快;补料过程中甘油浓度大于70g/L时,毕赤酵母生长受到抑制.与不加甘油相比较,诱导表达期维持培养基中甘油浓度在5g/L以下,重组水蛭素表达可提前4 h,诱导30 h其活性达13 000 ATU/mL,比仅用甲醇诱导时效价提高了7.7%.结论:降低初始培养基中甘油浓度有利于毕赤酵母生长,补料过程中培养基甘油浓度应维持在抑制毕赤酵母生长的浓度之下,诱导阶段培养基中少量的甘油有利于水蛭素的表达.
作 者：宋留君 周长林 窦洁 林健 SONG Liu-jun ZHOU Chang-lin DOU Jie LIN Jian 作者单位：宋留君,周长林,窦洁,SONG Liu-jun,ZHOU Chang-lin,DOU Jie(中国药科大学生命科学与技术学院,南京,210009)林健,LIN Jian(上海美通生物科技有限公司,上海,35)
刊 名：中国药科大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF CHINA PHARMACEUTICAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 37(4) 分类号：Q815 关键词：重组水蛭素 毕赤酵母 甘油猪IFNα在毕赤酵母中分泌表达条件的优化及高密度发酵
从发酵时间、接种量、pH值、诱导剂量等方面对重组基因工程(毕赤酵母甲醇利用缓慢型)的摇瓶发酵条件进行了优化,进一步探索了酵母菌表达猪IFNα的'发酵工艺,包括种细胞密度对初始发酵期的影响,补加甘油、甲醇速率条件的控制等.结果表明,摇瓶发酵时,诱导最佳时间为96 h,甲醇最适浓度为8 g/L,发酵pH范围为6.4～9.0,最适接种量2∶1.在分批发酵、接种量为10%且种子细胞光密度(OD600)为5～6时,最有利于细胞的高密度培养,在补料发酵时,根据溶氧控制甘油流加速率与时机,细胞干重达到118.75 g/L,在48 h重组猪IFNα表达量达到1.304 g/L.
作 者：蓝胜芝 于瑞嵩 俞明月 董世娟 曹祥荣 李震 Lan Shengzhi Yu Ruisong Yu Mingyue Dong Shijuan Cao Xiangrong Li Zhen 作者单位：蓝胜芝,俞明月,Lan Shengzhi,Yu Mingyue(南京师范大学生命科学学院,江苏,南京,210097;上海市农业遗传育种重点实验室,上海,06)于瑞嵩,董世娟,李震,Yu Ruisong,Dong Shijuan,Li Zhen(上海市农业遗传育种重点实验室,上海,201106;上海市农业科学学院畜牧兽医研究所,上海,201106)
曹祥荣,Cao Xiangrong(南京师范大学生命科学学院,江苏,南京,210097)
刊 名：南京师大学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2006 29(3) 分类号：Q939.9 关键词：猪IFNα 毕赤酵母 摇瓶发酵 高密度发酵重组毕赤酵母发酵生产S-腺苷甲硫氨酸培养条件优化
甲醇营养型毕赤酵母生产S-腺苷甲硫氨酸(SAM)是通过其表达的SAM合成酶催化L-甲硫氨酸(L-Met)和ATP反应而合成的..本文采用全合成培养基,在摇瓶上进行了培养条件的优化,确定了接种量、pH、PTM1、PO43-等初步条件.并根据SAM生物合成的特征,重点对其碳、氮源的影响作了进一步的分析优化.结果表明:当CaSO4 0.465g/L,K2SO4 9.10g/L,MgSO4・7H2O 7.45g/L,PO43-0.5mol/L情况下,生长阶段,甘油4%、硫酸铵4.00g/L为最佳;诱导表达阶段,L-Met1.0g/L,甘油与甲醇比例为0.5、硫酸铵8.00g/L为最佳.优化后,SAM产量诱导4d后达1.48g/L,诱导5d后可达1.70g/L(131mg/g干细胞),L-Met的转化率可达40.65%,既利于工艺放大又便于产品的分离纯化.
作 者：朱志钢 储炬 胡晓清 庄英萍 王永红 张嗣良 袁中一 ZHU Zhi-Gang CHU Ju HU Xiao-Qing ZHUANG Ying-Ping WANG Yong-Hong ZHANG Si-Liang YUAN Zhong-Yi 作者单位：朱志钢,储炬,胡晓清,庄英萍,王永红,张嗣良,ZHU Zhi-Gang,CHU Ju,HU Xiao-Qing,ZHUANG Ying-Ping,WANG Yong-Hong,ZHANG Si-Liang(华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,国家生化工程技术研究中心,上海,37)袁中一,YUAN Zhong-Yi(中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所,上海,31)
刊 名：工业微生物 ISTIC PKU英文刊名：INDUSTRIAL MICROBIOLOGY 年，卷(期)： 36(3) 分类号：Q939 关键词：毕赤酵母 高密度发酵 甲硫氨酸 S-腺苷甲硫氨酸人α-防御素基因克隆及其毕赤酵母表达的研究
为探讨人α-防御素(HNP2)酵母表达,根据HNP2氨基酸序列和巴斯德毕赤酵母密码偏爱性,设计HNP2基因序列片段,构建pGAPZαA-HNP2酵母表达载体,转化E.coliJM109,扩增重组子,经限制性核酸内切酶BlnI线性化,转毕赤酵母.PCR扩增挑选阳性转化子,SDS-PAGE分析酵母表达,利用阳离子交换树脂纯化HNP2,开展抗菌试验.结果显示转入巴斯德毕赤酵母HNP2基因得到表达,表达的HNP2具有显著的`抗菌作用.
作 者：李再新 罗惠波 周键 左勇 刘达玉 LI Zai-xin LUO Hui-bo ZHOU Jian ZUO Yong LIU Da-yu 作者单位：四川理工学院生物工程系,四川,自贡,643000 刊 名：分子科学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCE 年，卷(期)：2006 22(4) 分类号：Q81 关键词：人α-防御素 克隆 酵母表达 抗菌活性巴斯德毕赤酵母表达系统及其高水平表达策略
毕赤酵母表达系统是目前最为成功的外源蛋白表达系统之一,与现有的'其它表达系统相比,巴斯德毕赤酵母在表达产物的加工、外分秘、翻译后修饰以及糖基化修饰等方面有明显的优势,现已广泛用于外源蛋白的表达.该文综述了基自身的优点,表达载体和宿主菌的特点,以及高水平表达外源基因的策略.
作 者：胡世界 罗素兰 张吉贞 长孙东亭 HU Shi-jie LUO Su-lan ZHANG Ji-zhen ZHANGSUN Dong-ting 作者单位：热带生物资源教育部重点实验室,海南大学海洋学院,海南大学生物技术实验中心,海南,海口,570228 刊 名：生物技术 PKU英文刊名：BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 17(6) 分类号：Q786 关键词：巴斯德毕赤酵母 酵母表达系统 高水平表达 表达策略毕赤酵母表达HWTX-Ⅰ的不均一性分析
为了寻找毕赤酵母表达虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(HWTX-Ⅰ)时产生不均一性表达产物的原因,应用阳离子交换层析、反相HPLC、Tricine SDS-PAGE电泳、质谱等技术,对基因工程菌Pichia pastoris GS115/HWTX-Ⅰ表达的.不均一产物进行了分离、纯化和鉴定,并对不均一产物的N端和C端进行测序,结果表明:表达产物的不均一性主要体现在重组HWTX-Ⅰ的N端信号肽加工的不完全以及C末端的内部降解.生物学活性分析表明该不均一产物的活性仅为天然HWTX-Ⅰ活性的30%.同时,对如何避免不均一性表达产物的产生提出了相应的对策.
作 者：聂东宋 周延凯 曹佐英 刘宇 NIE Dong-Song ZHOU Yan-Kai CAO Zuo-Ying LIU Yu 作者单位：湖南理工学院化学化工系,岳阳,414000 刊 名：生物工程学报 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2006 22(2) 分类号：Q786 关键词：毕赤酵母 重组虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ 不均一性 基因工程