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少动鞘氨醇单胞菌ZX4儿茶酚2,3-双加氧酶基因的克隆与表达
摘要：应用PCR方法克隆了少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)ZX4菌株的儿茶酚2,3-双加氧酶基因(c23O-ZX4).核苷酸序列测定与分析表明,该基因片段全长924 bp且具有一个完整的阅读框,编码306个氨基酸残基.该基因与已报道的来自菌株S.yanoikuyae B1和Sphingomonas sp.KMG425的xylE基因(编码产物均为C23O)具有较高的核酸序列同源性,分别为94.37%和94.05%.通过Hind Ⅲ和Xho Ⅰ两个限制性酶切位点将该基因连接到质粒pET30(a)+上得到重组表达质粒pET-S3,并在E. coli BL21进行了表达,得到了42.3 kD的.融合蛋白.酶活测定发现该基因工程菌株的发酵产酶活力明显高于出发菌株.作 者：周德平 吴淑杭 闵航 姜震方 ZHOU De-ping WU Shu-hang MIN Hang JIANG Zhen-fang 作者单位：周德平,吴淑杭,姜震方,ZHOU De-ping,WU Shu-hang,JIANG Zhen-fang(上海市农业科学院环境科学研究所,上海,06)闵航,MIN Hang(浙江大学生命科学院,杭州,310029)
期 刊：上海农业学报 ISTICPKU Journal：ACTA AGRICULTURAE SHANGHAI 年，卷(期)：, 23(2) 分类号：X172 关键词：菲降解 少动鞘氨醇单胞菌 儿茶酚2,3-双加氧酶基因洋葱伯克霍尔德氏菌L68邻苯二酚2,3-双加氧酶基因克隆、表达和纯化
采用自行设计的引物,从洋葱伯克霍尔德氏菌L68中PCR扩增得到phnE(邻苯二酚2,3-双加氧酶)基因,亚克隆到高表达载体pET 32a上,转入表达菌株中.经双向测序,证实构建过程中未出现突变.重组子经IPTG诱导后,可以表达有活性的重组双加氧酶.选择26 ℃进行重组蛋白诱导.薄层扫描显示,表达重组蛋白总量最高可占总蛋白的64.92%.利用金属螯合层析对重组蛋白进行了一步纯化,SDS-PAGE结果显示,重组蛋白纯度达到95%.
作 者：吕鹏 刘大桅 张长铠 LUI Peng LIU Dawei ZHANG Chang-kai 作者单位：山东大学,微生物技术国家重点实验室,山东,济南,250100 刊 名：食品与生物技术学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 25(3) 分类号：Q93 关键词：洋葱伯克霍尔德氏菌 邻苯二酚2,3-双加氧酶 克隆表达 金属螯合层析一种可降解黄原胶的鞘氨醇单胞菌的凝集活性
采用血凝测试及血凝活性糖抑制测试方法,测定了一种可降解黄原胶的鞘氨醇单胞菌XT-11 Sphingomonas sp.对红细胞的凝集活性及糖抑制专一性,同时进行了温度、pH 及Ca2+对红细胞凝集活性影响的试验.结果表明:XT-11菌悬液能凝集家兔、家鸡两种红细胞,其凝集效价分别为26和24;菌悬液对兔红细胞的凝集作用可以被肝素所抑制;鞘氨醇单胞菌的.凝集活性不依赖于Ca2+,且在pH为6.0～10.0时较稳定,在温度为60℃时完全丧失凝集活性.这说明该菌含有能凝集红细胞的活性物质.
作 者：刘晗 孔晶 熊川男 李伟 白雪芳 杜昱光 LIU Han KONG Jing XIONG Chuan-nan LI Wei BAI Xue-fang DU Yu-guang 作者单位：刘晗,孔晶,熊川男,白雪芳,杜昱光,LIU Han,KONG Jing,XIONG Chuan-nan,BAI Xue-fang,DU Yu-guang(中国科学院,大连化学物理研究所,辽宁,大连,116023)李伟,LI Wei(大连水产学院,食品工程系,辽宁,大连,116023)
刊 名：大连水产学院学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF DALIAN FISHERIES UNIVERSITY 年，卷(期)：2006 21(3) 分类号：Q939.99 关键词：黄原胶 鞘氨醇单胞菌 红细胞 凝集活性离子注入法选育高效降解蒽的鞘氨醇单胞菌突变株
鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sp.)AN1及其原生质体经N+离子注入诱变处理,蒽的'降解率分别提高了29.3%和36.2%,总变异率分别为80%～100%、60%～80%,耐蒽浓度分别达到300mg/L、400mg/L;突变株经15代遗传稳定性检测,有2株(AN815-3,AN315-5)的性状可稳定遗传,其降解率分别为73%,75%,诱变效果显著.
作 者：王海 张甲耀 方呈祥 秦广雍 魏明宝 WANG Hai ZHANG Jiayao FANG Chengxiang QIN Guangyong WEI Mingbao 作者单位：王海,WANG Hai(武汉大学资源与环境科学学院,武汉,430072;武汉市环境保护科学研究院)张甲耀,魏明宝,ZHANG Jiayao,WEI Mingbao(武汉大学资源与环境科学学院,武汉,430072)
方呈祥,FANG Chengxiang(武汉大学中国典型培养物保藏中心)
秦广雍,QIN Guangyong(郑州大学离子束生物诱变育种研究中心,郑州,42)
刊 名：环境科学 ISTIC PKU英文刊名：ENVIRONMENTAL SCIENCE 年，卷(期)：2005 26(1) 分类号：X172 关键词：离子注入 环境微生物 原生质体 遗传稳定性盐单胞菌属BYS-1四氢嘧啶合成基因ectABC克隆及其盐激表达
利用SEFA-PCR技术从中度嗜盐菌Halomonas sp.BYS-1总DNA中克隆了四氢嘧啶合成基因ectABC及其上游序列(GenBank accession number DQ017757);OMIGA软件分析结果显示ectA、ectB、ectC位于同一个操纵子上,大小分别为573bp、1251bp和387bp,预测编码的.DAT(L-二氨基丁酸转氨酶)、DAA(L-二氨基丁酸乙酰转移酶)和ES(四氢嘧啶合酶)大小分别为21.1kDa(191 amino acid)、45.7kDa(417 amino acid)和14.5kDa(129 amino acid);将包含ectABC基因及其上游1000bp序列的片段克隆到pUC19中并转化E.coli DH5α,转化子E.coli(pUC19ECT)能够在盐激条件下合成四氢嘧啶,但其耐盐能力没有得到显著改善.
作 者：何健 黄星 顾立锋 蒋建东 李顺鹏 HE Jian HUANG Xing GU Li-feng JIANG Jian-dong LI Shun-peng 作者单位：南京农业大学生命科学学院微生物学系,农业部农业环境微生物工程重点开放实验室,南京,210095 刊 名：微生物学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA MICROBIOLOGICA SINICA 年，卷(期)： 46(1) 分类号：Q786 关键词：四氢嘧啶 ectABC基因 SEFA-PCR Halomonas sp.BYS-1 盐激表达嗜水气单胞菌温敏胞外蛋白酶基因eprJ的克隆与检测
根据已发表的人源嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)温敏胞外蛋白酶基因eprA1的核甘酸序列,设计合成一对引物,以嗜水气单胞菌鱼源株Ah J-1基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到1 005 bp的胞外蛋白酶基因eprJ1,将该基因片段连接到pMD18-T载体中,构建克隆载体pMD-eprJ1.序列分析发现,其与发表的Ah AH1的胞外蛋白酶eprA1基因的同源性有91%.根据测序结果在保守区重新设计一对引物以增强特异性,扩增片段大小为387 bp.对1990～2004年15年间从浙江、福建、湖北及江苏等地不同患病水产动物肝肾等脏器分离到的23株Ah检测结果显示,从中国东南地区分离的'21株Ah水生动物致病性菌株扩增均为阳性,2株Ah非致病性菌株为阴性,推测该基因普遍存在于致病性Ah中.检测模板DNA的灵敏度可达1.5×10-3 ng/μL.
作 者：任燕 陆承平姚火春 REN Yan LU Cheng-ping YAO Huo-chun 作者单位：任燕,REN Yan(中国水产科学研究院珠江水产研究所鱼病中心,广州,510380)陆承平,姚火春,LU Cheng-ping,YAO Huo-chun(南京农业大学,农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室,江苏,南京,210095)
刊 名：中国水产科学 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF FISHERY SCIENCES OF CHINA 年，卷(期)：2006 13(6) 分类号：S94 关键词：嗜水气单胞菌 温敏胞外蛋白酶基因 克隆与检测