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PRRSV云南株的分离与鉴定
从云南某猪场采取病料经RT-PCR检测为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS)阳性,将其处理后接种到猪肺泡巨噬细胞(PAM)和Marc-145细胞上.接种后3 d,猪肺巨噬细胞开始出现细胞病变(CPE);Marc-145细胞盲传3代后,细胞也出现了CPE.对出现CPE的细胞培养物,用RT-PCR法、间接免疫荧光试验进行检测,结果均为PRRSV阳性;细胞培养物经PEG初步浓缩后,接种到PRRSV阴性,PRV、CSFV抗体阳性的仔猪,15 d后猪只出现体温升高并伴有食欲减退,精神不振等症状.采血并用同上的'RT-PCR法检测,结果为阳性;采血用同上的RT-PCR法检测,结果亦为阳性;用电镜对纯化后的病毒进行观察,可见有囊膜包裹的圆形病毒粒子,其直径约为50 nm;间接免疫荧光实验可见黄色荧光;TCID50测定其毒价为10-4.75/0.1 mL.该病毒对氯仿、紫外线、酸碱度变化(pH<5.0或pH>7.5)和热敏感;结果表明,已成功分离获得一株PRRSV云南地方流行毒株,命名为YN-1.
作 者：段博芳 沈艳萍 杨贵树 张?飞 吴静敏 段纲 尹革芬 DUAN Bo-fang SHEN Yan-ping YANG Gui-shu ZHANG Yan-fei WU Jing-min DUAN Gang YIN Ge-fen 作者单位：段博芳,杨贵树,张?飞,吴静敏,段纲,尹革芬,DUAN Bo-fang,YANG Gui-shu,ZHANG Yan-fei,WU Jing-min,DUAN Gang,YIN Ge-fen(云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明,650201)沈艳萍,SHEN Yan-ping(振太畜牧兽医站,云南镇沅,666508)
刊 名：动物医学进展 PKU英文刊名：PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE 年，卷(期)： 31(4) 分类号：S852.659.6 S858.28 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离 鉴定猪源链球菌LY株的分离和鉴定
对链球菌分离株LY株进行了形态鉴定、培养特性鉴定,生化特性鉴定、血清型鉴定、毒力鉴定以及免疫原性鉴定,为研制新型的'C群链球菌灭活疫苗进行了有益的探索.
作 者：王丽杰 WANG Li-jie 作者单位：黑龙江省宝泉岭分局动物卫生监督所,黑龙江宝泉岭,154211 刊 名：吉林畜牧兽医 英文刊名：JILIN ANIMAL HUSBANDRY AND VETERINARY MEDICINE 年，卷(期)： 30(2) 分类号：S855.1+1 关键词：链球菌 LY 鉴定 分离耐高温乳酸菌的分离与鉴定
耐高温乳酸菌的分离与鉴定【1】
【摘要】 目的：本实验从不同地方采集的青贮玉米饲料、果渣、牛奶、新鲜的泡菜汁等样品中筛选耐高温乳酸菌。
方法：通过初筛、复筛，获得一株耐高温且产酸能力较强的菌株L1;依据伯杰氏系统细菌学手册和乳酸菌分类鉴定的标准和描述，对其进行了生理生化特性鉴定;通过单因素试验和正交试验确定菌株L1的最佳发酵条件。
结果：确定其为乳杆菌属德氏乳杆菌;最佳增殖培养基组分为：玉米粉16%+麸皮5%;在α-淀粉酶(5 U/g玉米粉、90 ℃、30 min)和糖化酶(150 U/g玉米粉、55 ℃、2 h～3 h)酶解作用下，最佳发酵条件为：发酵温度60 ℃，发酵时间36 h，pH值3.5。
结论：经过初筛、复筛获得一株耐高温菌株L1，通过糖发酵等生理生化试验、正交试验鉴定，最后确定此菌株为乳杆菌属德氏乳杆菌(LacotobaciLLus deLbbruecki)。
【关键词】 耐高温乳酸菌;分离;鉴定
乳酸菌(Lactobacillus)是一类能从可发酵碳水化合物(主要指葡萄糖)产生大量乳酸的细菌的统称[1]。
由于乳酸菌具有糖利用率高、发酵液中纯度高、副产物少，使其在乳酸工业中占有重要地位[2]。
乳酸菌在食品发酵、青贮饲料、堆肥生产、医药行业等众多领域有着广泛的应用研究[3，4]，而在众多固态发酵领域中一个难以解决的问题是固态发酵中高温迅速产生对乳酸菌的杀灭作用，因而选育耐高温菌株具有极为重要的理论意义和广阔的应用前景。
本研究从青贮饲料、果渣、泡菜、牛奶中分离高温乳酸菌，并对其发酵条件的优化进行了初步研究。
1 材料与方法
1.1 实验材料
乳酸菌：从上海光明乳业金山牧场提供的青贮玉米饲料、陕西海盛果汁厂提供的果渣、山东牟平安得利果汁厂提供的果渣、西安农贸市场购得的新鲜泡菜汁、上海光明乳业提供的牛奶中进行分离，将收集的样品带回实验室置于4 ℃冰箱保存备用。
标准菌株：德氏乳杆菌(Lactobacillus delbbruecki) JCM 1022、嗜酸乳杆菌(Lacidophilus) ATCC 3456、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)IFO 13957,由陕西微生物研究所提供。
培养基: 玉米粉麸皮发酵培养基、生化鉴定培养基。
1.2 实验方法
1.2.1 乳酸菌的分离、筛选： 固体样品青贮玉米饲料、果渣等5 g放入灭菌研钵研碎后移入其他灭菌容器内，加500 mL无菌生理盐水稀释，振荡5 min，充分混匀;液体样品牛乳取1 mL移入9 mL的灭菌生理盐水的试管中，摇匀;对新鲜的泡菜汁取1 mL移入9 mL无菌水中，摇匀;然后将上述样品按照 10倍稀释法稀释至10-5、10-6、10-7，用移液枪分别移取0.1 mL到0.5% CaCO3的MRS培养基并加焦性没食子酸的厌氧培养基上，37 ℃培养24 h～48 h，形成菌落后观察其形态，挑取周围有溶钙圈的菌落。
在MRS平板上反复划线直到得到单菌落;将上述分离的乳酸菌进行革兰氏染色形态观察，淘汰革兰氏染色阴性的菌株，保留革兰氏染色阳性的菌株;同时做接触酶试验，最后保留接触酶试验阴性的菌株。
综上结果，将菌落周围有溶钙圈、革兰氏染色阳性、接触酶试验阴性的菌株暂定为乳酸菌，最后将其分别转移至MRS斜面培养基上，做好标记，于4 ℃条件下保藏。
1.2.2 乳酸菌复筛：(1)最适生长温度的测定：将待测菌株活化后分别置于温度为50 ℃、55 ℃、60 ℃、65 ℃、70 ℃的恒温箱中培养，培养24 h后测其总菌数。
(2)最适酸碱度的测定：将上述耐温能力强且菌数量较多的菌株放在适中的温度下培养，测其在不同培养时间培养液pH值的变化情况。
1.2.3 耐高温乳酸菌的鉴定： 用光学显微镜进行乳酸菌的形态学鉴定; 参照伯杰氏细菌鉴定手册及《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》进行生理生化特性鉴定[4]。
2 结果
2.1 分离到的菌株
从不同地区采集的样品中共分离到有溶钙圈较大的、革兰氏阳性的、接触酶试验阴性的菌株共6株，显微镜下观察菌体形态，其中球菌3株，杆菌3株，分别对其进行编号，球菌记为R，杆菌为L。
2.2 优良菌株筛选结果
2.2.1 耐温能力筛选：6株菌的耐温能力见表1。
由表1得出：在各温度条件下，菌株L1、L2、R1的菌数量均多于菌株L3、R2、R3的菌数量，所以选择菌株L1、L2、R1作下一步的试验。
表1 菌株培养温度与菌数的关系
2.2.2 产酸能力筛选：将菌株L1、L2、R1在60 ℃恒温箱中培养，测其在不同培养时间培养液pH的变化情况，培养结果见表2。
通过表2可见，三株菌的产酸能力，L1菌株在20 h时，其pH值就下降到4.1，而其它两株菌产酸则较慢。
表2 菌株培养时间与pH值的关系
2.3 乳酸菌鉴定
2.3.1 形态学鉴定：菌株L1的革兰氏染色阳性，中长杆状、单个或链状;菌落形态呈灰白色、圆形、边缘完整、表面光滑、隆起。
高效硝化细菌的分离与鉴定
采用连续进水方式进行硝化细菌富集培养,筛选得到了一株硝化强度达到15.7 mg・L-1・d-1的硝化细茵N-5.通过形态学特征、亚硝酸氧化酶(Nor)电泳分析、一般生理生化特征的初步鉴定等方法对筛选菌株进行鉴定,依据<伯杰氏细菌鉴定手册>进行分类,确定筛选的N-5为硝化球茵属(Nitrococcua)中的'活动硝化球菌(Nitrococcus mobils).
作 者：余敦耀 邱雁临 朱影 YU Dun-yao QIU Yan-lin ZHU Ying 作者单位：余敦耀,邱雁临,YU Dun-yao,QIU Yan-lin(湖北工业大学生物工程学院,湖北,武汉,430068)朱影,ZHU Ying(华中农业大学食品科学技术学院,湖北,武汉,430070)
刊 名：化学与生物工程 ISTIC英文刊名：CHEMISTRY & BIOENGINEERING 年，卷(期)： 25(4) 分类号：Q939.114.04 关键词：硝化细菌 分离 鏊定 亚硝酸氧化酶1株裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)的分离鉴定
采用松树花粉诱集法从乐清湾红树林分离到一株纯培养物,其特点为:营养菌体为椭圆球形,单核;营养菌体的`细胞壁由许多紧压在一起的致密鳞片层构成,在细胞壁不连续处可分辨鳞片;营养菌体形成外质网,它产生于外质网形成体;营养菌体以产生游动孢子行无性繁殖,游动孢子为双鞭毛;无性繁殖过程中形成四分体结构.据此鉴定为裂殖壶菌(Schizochytrium sp.).
作 者：周茂洪 周林 赵肖为 余林静 林娜 ZHOU Mao-Hong ZHOU Lin ZHAO Xiao-Wei YU Lin-Jing LIN Na 作者单位：温州大学应用技术学院,温州,325035 刊 名：微生物学通报 ISTIC PKU英文刊名：MICROBIOLOGY 年，卷(期)： 33(4) 分类号：Q939.97 关键词：裂殖壶菌 破囊壶菌 红树林 乐清湾两株乳酸菌的分离鉴定及产酸性能的研究
从泡菜中分离筛选出两株乳酸茵Lactll和Leull,根据形态特征、生理生化特性进行初步鉴定,并选取室温(白天20℃左右,晚上12℃左右),25℃,37℃三种温度对两株乳酸茵进行培养,通过定时测定两株乳酸菌在三种不同温度下的pH值来考察不同乳酸菌的产酸性能.经初步鉴定,两菌株分别为短乳杆菌、乳球菌.对这两菌株产酸性能的'测试结果表明.两株乳酸菌在37℃下培养产酸速率快,同一温度下培养,Leull产酸速率大于Lactll.
作 者：葛红莲 郭翠红 张军令 GE Hong-lian GUO Cui-hong ZHANG Jun-ling 作者单位：葛红莲,郭翠红,GE Hong-lian,GUO Cui-hong(周口师范学院生命科学系,河南周口,466000)张军令,ZHANG Jun-ling(开封市畜牧局,河南开封,475000)
刊 名：周口师范学院学报 英文刊名：JOURNAL OF ZHOUKOU NORMAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 26(2) 分类号：Q93-3 关键词：分离 鉴定 乳酸茵 温度 产酸性能三株鸡传染性法氏囊病毒弱毒株的分离与分子鉴定
本试验在江苏省鸡场分离获得3株鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV),采用RT-PCR法扩增、,VP2基因,将产物克隆入pMD18T栽体,经测序,并与IBDV代表株VP2基因的高变区序列进行分析比较.结果显示,3个分离株与超强毒株、强毒株、突变株及弱毒株的核苷酸同源性在89.5%～98.9%之间,与弱毒株Cu-1和疫苗株PBG-98同源性最高,为98.9%;推导出的`氨基酸序列与代表性毒株的同源性在98.2%～99.5%之间.其中,七肽区的第三个丝氨酸残基突变为精氨酸或苏氨酸,279和284住氨基酸残基突变为天冬氨酸和苏氨酸,222、294和299位氨基酸残基分别突变为脯氨酸、亮氨酸和天冬氨酸.上述试验表明3株分离株均为临床弱毒株.
作 者：袁维峰 吴保明 张鑫宇 夏晓丽 孙怀昌 YUAN Wei-feng WU Bao-ming ZHANG Xing-yu XIA Xiao-li SUN Huai-chang 作者单位：扬州大学兽医学院,扬州,225009 刊 名：中国动物传染病学报 英文刊名：CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY 年，卷(期)：2009 17(1) 分类号：S852.65 Q785785 关键词：传染性法氏囊病毒 VP2基因 弱毒株 鉴定两株银杉根际土壤真菌的分离与分子鉴定
对银杉根际土壤中的真菌进行培养分离,得到了形态上很相似的两株真菌F-1和F-2.在基于形态特征鏊定困难的情况之下,对真菌F-1和F-2的rDNA ITS区进行PCR扩增和测序.真菌F-1和F-2的ITS序列与来自于10个属30个种的'不同真菌的ITS序列进行序列比较和系统发育分析,结果表明:真菌F-1属于木霉属(Trichoderma),真菌F-2属于被孢霉属(Mortierella).结果表明,基于分子水平的鏊定方法具有快速、准确、简便、高效等特点,在真菌鉴定分类研究中起着重要作用.
作 者：赵颖茹 苟小军 颜军 ZHAO Yingru GOU Xiaojun YAN Jun 作者单位：赵颖茹,ZHAO Yingru(北京林业大学生物科学与技术学院,北京,100083)苟小军,颜军,GOU Xiaojun,YAN Jun(成都大学中药化学实验室,四川,成都,610106)
刊 名：成都大学学报（自然科学版） 英文刊名：JOURNAL OF CHENGDU UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE) 年，卷(期)： 28(2) 分类号：Q939.5 关键词：真菌 ITS 系统发育 分子鏊定光合细菌菌剂中-株粘质沙雷氏菌的分离与鉴定
应用传统的'细菌分类方法,并结合16SrRNA系统鉴定,将光合细菌菌剂中分离得到的一株细菌(RZ21)鉴定为沙雷氏菌属粘质沙雷氏菌.
作 者：闵涛玲 杨启银 曩潇潇 周耀明 作者单位：闵涛玲,杨启银,曩潇潇(南京师范大学生命科学学院资源微生物工程研究室,江苏南京,210097)周耀明(南京师范大学化学与环境科学学院,江苏南京,210097)
刊 名：安徽农业科学 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES 年，卷(期)： 34(22) 分类号：Q93 关键词：粘质沙雷氏菌 光合细菌 分离与鉴定水貂链球菌的分离鉴定与防治
链球菌病主要是由β溶血性链球菌引起的多种人畜共患病的'总称.其临床表现多种多样,主要引起各种化脓创和败血症,也可表现为各种局限性感染,其中尤以猪的链球菌病最为常见.
作 者：邱浩 作者单位：山东省平邑县畜牧局,273300 刊 名：上海畜牧兽医通讯 英文刊名：SHANGHAI JOURNAL OF ANIMAL HUSBANDRY AND VETERINARY MEDICINE 年，卷(期)：2009 “”(3) 分类号：S8 关键词：★ 职责分离
★ 分离四年级作文
★ 分离说说签名
★ 毕业分离作文
★ 作文分离初一
★ 分离作文400字
