这次小编给大家整理了改进的大鼠肝实质细胞的快速分离及鉴定方法（共含10篇），供大家阅读参考，也相信能帮助到您。同时，但愿您也能像本文投稿人“禾与斗”一样，积极向本站投稿分享好文章。
改进的大鼠肝实质细胞的快速分离及鉴定方法
介绍一种分离、鉴定肝实质细胞的新方法. 采用恒流泵、不锈钢滤网等简易灌流装置,对成年大鼠进行原位灌注分离肝实质细胞;并根据肝实质细胞能组成型表达6-磷酸葡萄糖酶这一特性,采用酶细胞化学技术鉴定肝实质细胞.经本实验改进的肝实质细胞分离方法具有简便、快捷、可靠的特点,为进一步研究肝实质细胞的.各种功能奠定了基础.
作 者：张文学 李莉 赵良真 刘文玲 徐存拴 ZHANG Wen-xue LI Li ZHAO Liang-zhen LIU Wen-ling XU Cun-shuan 作者单位：河南师范大学,生命科学学院,河南,新乡,453007 刊 名：河南师范大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF HENAN NORMAL UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE) 年，卷(期)： 34(2) 分类号：Q291 关键词：大鼠 肝实质细胞 6-磷酸葡萄糖酶大鼠骨髓间质干细胞的分离纯化与鉴定
采用密度梯度离心法分离骨髓间质干细胞,差速贴壁法进行纯化,应用流式细胞仪、激光共聚焦显微镜等对纯化细胞进行鉴定,结果细胞表面抗原CD29,CD44,CD105,CD166 表达呈阳性,而 CD14,CD34,CD45表达呈阴性.采用RT-PCR鉴定了三个基因:nestin,NST,Oct-4,前两者呈阳性表达,后者弱阳性表达.这些细胞特异抗原与基因表达综合起来,表明得到的细胞具备骨髓间质干细胞的特性.密度梯度分离与差速贴壁相结合,可获得较好均一性的`骨髓间质干细胞,是一种简单可靠、易于推广的骨髓干细胞获取方法,可为细胞与组织工程研究提供种子细胞.
作 者：张荣利 冯雪 张会亮 罗国安 李连达 王义明 Zhang Rongli Feng Xue Zhang Huiliang Luo Guoan Li Lianda Wang Yiming 作者单位：张荣利,冯雪,罗国安,王义明,Zhang Rongli,Feng Xue,Luo Guoan,Wang Yiming(清华大学生命科学与医学研究院,北京,100084)张会亮,Zhang Huiliang(清华大学生命科学与医学研究院,北京,100084;山东师范大学生命科学学院,济南,250014)
李连达,Li Lianda(中国中医科学院西苑医院,北京,100091)
刊 名：中国工程科学 ISTIC英文刊名：ENGINEERING SCIENCE 年，卷(期)： 9(7) 分类号：Q789 Q813 关键词：大鼠 骨髓间质干细胞 流式细胞分析蛋黄和蛋清快速分离的方法
蛋黄和蛋清快速分离的方法【1】
1、蛋黄和蛋清快速分离可以用凿口法。
把鸡蛋竖起来,底部凿一个小口(不能太大,否则蛋黄也会流出来,别忘在鸡蛋下面放个碗之类的器具)。
然后慢慢晃动鸡蛋,蛋清就都流到碗里了。
这个方法比较简易可行,而且不借助其它工具,比较简单。
如果不小心蛋壳弄破了,可以蛋黄倒进一只杯子里,盛满水,1--2天内,蛋黄任可以保持新鲜不坏。
2、蛋黄和蛋清快速分离可以用瓶吸法。
准备一个干净的空塑料瓶,然后捏紧瓶身(稍微倾斜)对准蛋黄后松开,蛋黄就进入到了瓶子里面。
吸鸡蛋时要把瓶子倾斜着吸,否则蛋黄又滑落回去了。
尽量把瓶子刷洗干净,蛋黄还要再用。
此方法必须把瓶口对准蛋黄,技术含量大一些,对不准容易把蛋清也吸进去。
3、蛋黄和蛋清快速分离可以用漏勺法。
把鸡蛋打到碗里后,可以用大一些的漏勺直接把蛋黄舀起来,注意漏勺不要把蛋黄划破。
等蛋清流到碗里后,蛋清和蛋黄成功分离。
4、蛋黄和蛋清快速分离可以用手捞法
最简便的一种方法,就是直接倒在碗然后里用手捞蛋黄,这时蛋清会自动滑落,怎么样,简单吧!注意:一次最多捞出两个,否则会混在一块;一定要洗干净你的手哦。
5、蛋黄和蛋清快速分离可以用分离器法
这次需要借助我们的分离器(不贵,一般超市有卖,没有的话也可以去淘宝看看。),用法很简单,只需要将鸡蛋倒在上面摇晃一下,蛋清就会流下去,上面就是我们需要的东西—蛋黄啦!
6、蛋黄和蛋清快速分离可以用扣杯法。
就是把鸡蛋打到碗里后,用个小茶杯(尽量小一些的,最好和蛋黄差不多大,或者大一点)扣在蛋黄上面,直接把蛋清倒出来就可以了,这样碗里只剩下蛋黄了。
没有茶杯,用直径和蛋黄差不多大的圆柱体容器也可以。
蛋黄的作用【2】
蛋黄有补充水分、滋润肌肤的作用。
蛋黄可以保护视力,叶黄素和玉米黄素跟保护眼睛有密切的关系。
叶黄素和玉米黄素的作用都具有很强的抗氧化作用,特别有保护眼睛的作用。
鸡蛋的脂肪绝大部分集中在蛋黄中，蛋黄中脂肪的`主要成分是磷脂和胆固醇。
磷脂是蛋黄的主要成分,它起乳化作用。
进入人体中的磷脂所分离出来的胆碱,具有防止衰老的作用。
蛋黄含有胆固醇，胆固醇在人体生长发育、生殖等生理过程中起重要作用。
生活中注意从食物中适度地吸取胆固醇等营养素,完全可以做到增进健康和防治疾病。
维生素在鸡蛋中很丰富,特别是维生素A,都贮存在蛋黄中,起到新陈代谢的作用。
蛋黄含有铁元素，铁元素在人体中起造血和血中运输氧、二氧化碳和营养物质的作用。
鸡蛋里还有磷质,是构成人体必需的磷酸,起到供能和维持内环境稳定的作用。
蛋黄中有一种非常重要的物质——卵磷脂,对大脑发育格外关键,还有降低胆固醇的作用。
蛋清的作用【3】
治疗烧伤时,蛋清有收敛作用,能降低毛细血管的通透性,涂布后形成痂膜,起到了保护作用,能减少体液渗出,防止继发性休克的发生;同时痂膜又能防止不洁物质的污染和外来刺激,有减轻疼痛的作用。
治疗体表炎症对早期疖肿、外伤性肿胀和严重的局部注射反应,局部敷蛋清,有止痛、消炎、防止化脓的作用;对已开始化脓的也有控制炎症扩展,促使炎症局限化的作用。
蛋清性微寒而气清,能易经补气,润肺利咽,清热解毒,补充优质蛋白质,护肤,美容,有助于延缓衰老。
取鸡蛋清一个,白矾些许,调匀,去泡沫后服用,可以清痰,止咳。
蛋清不但可以使皮肤变白,而且能使皮肤细嫩。
这是因为它含有丰富的蛋白质和少量醋酸,蛋白质可以增强皮肤的润滑作用,醋酸可以保护皮肤的微酸性,以防细菌感染。
此外,鸡蛋清还具有清热解毒和增强皮肤免疫功能的作用。
一株啤酒污染菌的分离鉴定及快速检测方法
在成品瓶装啤酒中分离得到1株有害的'污染菌.经表型性状分析、生理生化反应、G+C含量测定以及16S rDNA序列分析,鉴定为Lactobacillus acetotolerans.建立了1种新的快速鉴定啤酒有害菌的PCR方法,这种方法基于抗酒花基因horA的部分序列.用传统的检测方法检测有害菌需要8～10 d,而用新的PCR方法仅需24～32 h.
作 者：田小群 周世宁 TIAN Xiao-qun ZHOU Shi-ning 作者单位：中山大学生命科学学院,广东,广州,510275 刊 名：中山大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS SUNYATSENI 年，卷(期)： 45(4) 分类号：Q93 关键词：啤酒有害菌 快速鉴定 PCR Lactobacillus acetotolerans目的 对体外留置肝靶向性给药途径的大鼠动脉插管模型进行改进，并探讨建立此模型的技术要点。方法 在10倍手术显微镜下，采用特制内径0.5 mm导管（由硬膜外麻醉导管加工而成）经胃十二指肠动脉剪口处插入肝动脉血管内，逆行到达肝固有动脉开口处后留置导管并固定。结果 20只大鼠造模，成功者17只，成功率为85%。结论 改进型大鼠肝动脉插管并体外留置模型较以往造模方法简单，并提高了模型成功率，技术易于推广，可应用于抗肝肿瘤、肝衰竭等靶向性给药的研究。
〔Abstract〕 Objective To improve the model of hepatic artery(HA) catheter and detain the catheter in vitro in rats, and approach the skill keys and value of establishing the model. Method Under the operation microscope(10×), a self-made catheter with 0.5mm ID, developed by peridural anesthetic catheter, was intubated into hepatic artery, through gastroduodenal artery, then the catheter was retained and fixed in rats. Result 20 rats were used to establish the model， in which 17 rats model were successful, the ratio was 85%. Conclusion The improved model is much easily established and achievement ratio is higher than others, which may be used to study on targeting administration in curing liver tumor or hepatic failure.
〔Key words〕 Model; rats; HA catheterization; detaining in vitro; improvement
肝固有动脉插管的动物模型建立早有报道，但原有的方法易造成肝脏损伤、死亡率高，技术难以掌握。在实验研究中我们改进造模方法，掌握了技术要点，取得较为满意的效果，现将实验方法报道如下。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 动物 健康SD大鼠20只，清洁级，体质量（300±50）g，雌雄各半。由湖南农业大学动物实验中心提供，合格证号sck(湘）-0003。
1．1．2 手术器械 止血钳4把，有齿镊、持针器各1把，12.5 cm显微镊1把，14 cm显微剪1把，系线镊2把，小动脉夹数枚，缝合针数枚，0号、4号缝合丝线各数支，自制内径0.5 mm动脉插管数根（由硬膜外麻醉导管加工而成）。
1．1．3 仪器 Z20P5 10倍手术显微镜：苏州六六视觉科技股份有限公司；ES-1100型电子天平：长沙湘平科技发展有限公司。
1．1．4 药品 戊巴比妥钠：国药集团化学试剂有限公司，批号：F1117，25 g/瓶，肝素钠注射液：江苏万帮生化医药股份有限公司，12 500 u/（mL·支），青霉素钠注射液：山西太行药业股份有限公司，80万u/支。
1．2 方法
拟参考Lindell肝动脉插管法[1]及赖力英等人的方法[2]进行改进，具体步骤如下。
1．2．1 术前准备 术前1天停止喂食，自由饮水；将硬膜外麻醉导管置于60 ℃恒温水浴箱中，预热拉长为内径约0.5 mm的导管，插口处剪成锲形，管内插入0.5 mm动脉介入导管的金属导丝；于手术前30 min经大鼠尾静脉注射50 u/mL肝素钠溶液2 mL进行手术前血液肝素钠化；以2%戊巴比妥钠45 mg/kg腹腔注射麻醉。
1．2．2 造模方法 剑突以下的腹部剃毛后，络合碘消毒皮肤，手术按常规无菌手术规程操作。在腹部正中用手术刀切开皮肤切口2.5～3.0 cm，用无齿镊提起腹肌沿腹白线剪开腹肌，用止血钳钳夹切口两侧的腹肌，暴露肝脏；于胃与肝交界处用棉签钝性分离肝脏乳头叶，在其下方肝门区找到肝门静脉、肝固有动脉和胆管三者并行的Glisson系统，以最底下管径较粗的肝门静脉定位，中间外径较圆且有搏动的管道为肝固有动脉，下行分出胃十二指肠动脉及胃右动脉，右行为肝总动脉。去除血管外壁的结缔与脂肪组织，将各血管分离； 胃十二指肠动脉与胃右动脉交界处用0号丝线结扎血管，近心端用丝线套起备用，小动脉夹夹闭肝总动脉，在血管己经结扎处前方剪开血管壁约1/3~1/2（见图1），剪口前短暂松小动脉1次使胃右动脉血管充盈；将特制导管经胃、十二指肠动脉剪口入动脉血管，逆行到达肝固有动脉开口处，将导管内金属导丝退出，确认管腔通畅后，近心端用已经套起的丝线结扎并固定，松开动脉夹； 从腹壁引出导管并固定，连续缝合腹壁肌层。皮肤切口以75%乙醇消毒后用丝线缝合，引出的导管潜行于皮下至颈背部引出，用50 u/mL肝素钠生理盐水溶液封管，导管末端在乙醇灯下烧灼封口；术后大鼠臀部肌肉注射青霉素钠20 000 u/100 g，1次/3~5 d，防感染；隔天用生理盐水通管，并用50 u/mL肝素钠生理盐水溶液封管；每只大鼠单笼饲养。
2 结果
术中2只大鼠由于胃、十二指肠动脉剪口处血管断裂无法插管；术后20 h 1只因伤口渗血、便血而死亡；其余17只全部存活，成功率达85%，且术中出血量少，肝叶没有出现明显的损伤。术后0.5~1 h完全清醒，术后8 h可以行走，12 h饮食、活动逐渐恢复正常，伤口4 d完全愈合。术后留置管能顺利导入药物入肝，并能长期维持此功能（见图2）。
3 讨论
目前在以肝脏为靶脏器的药效研究仍不理想，除了药物本身的药理作用原因外，肝靶向性差可能是重要的原因之一[3]。药物必须在其作用部位达到足够的浓度方能产生其特征性效应[4]。药物经周围静脉进入血液循环后，经过药代动力学的改变，到达肝脏的浓度已相当低，从而影响了临床疗效。而大剂量药物使用又可能造成对其他脏器的严重毒副作用，或医疗成本的提高。经由导管置入肝固有动脉的开口，药物可以不经体循环，顺血流直接作用于肝脏，肝靶向性强。这项技术能有效的提高药效、减低用药剂量、降低治疗成本以及减少药物的毒副作用。如，肝癌血供的90％以上来自肝动脉，经肝动脉给药可有效提高肿瘤局部的药物浓度，从而提高药效，减少抗肝肿瘤药物对其它脏器的毒副作用。所以肝动脉插管并体外留置大鼠模型在抗肝肿瘤、肝衰竭等研究药物对肝脏作用是有重要意义。
在药物对肝脏靶脏器作用的研究中，Lindell肝动脉插管法常用于一次性的给药实验，在打开动物腹腔导入药后又重新关闭，不能多次性的`重复给药。而在科研实验中，往往需要多次乃至长期给药，这就需要肝动脉导管长期体外留置备用，而目前这方面的模型建立报道较少。参照现有的相关文献进行模型构建，发现有不少不足之处：①肝固有动脉和胃、十二指肠动脉难以定位，寻找时，极容易造成肝包膜下瘀血及肝叶损伤；②导管插入成功后，回流的血液极易在狭窄的管道内凝固而阻塞管道；③手术意外、动物死亡常见，失败率高。
在成功建立大鼠肝动脉插管并体外留置模型之后，总结经验认为此技术改进的关键有以下几点。
①大鼠的选择 鼠龄太小或体质量太轻，其胃、十二指肠动脉管径相应会过小而致导管无法插入；鼠龄太大，血管与脂肪组织粘连过多难以分离，且血管老化失去弹性极易断裂；选择鼠龄在16~30周，体质量在250~350 g的大鼠，实验效果比较理想；②手术前血液肝素钠化可以避免在导管插入成功后，回流的血液凝固阻塞管道，同时也可以起到充盈靶血管的作用，但要注意避免肝素用量过大而致伤口渗血、不愈合；③麻醉剂及量的选择 在参阅文献及预实验效果比较后最终选择了戊巴比妥钠，它具有起效快、可控性强、副作用小等优点[5]；鉴于实验大鼠个体差异性，以2%戊巴比妥钠45 mg/kg标准，先推总量的2/3，以全身软瘫、角膜反射消失为进行麻醉完成的基准，若不足余下的以0.1 mL/次试推直至完成；④血管分离 Glisson系统中肝门静脉、肝固有动脉和胆管三者被共同的血管周围纤维囊所包裹，故术中血管分离操作须十分小心，尽量祛除血管外壁的结缔与脂肪组织将各血管分离，以便于血管结扎、剪切口；因为大鼠肝叶较脆，血运丰富，所以动作要轻柔，尽量避免机械损伤；动脉夹夹闭肝总动脉时间不宜过长，尽量将肝脏缺血再灌注损伤降低至最低程度；⑤导管留置 导管插入后松开动脉夹，可见管内血液回流，为导管插入成功的标志；导管潜行于皮下是其长期留置体外的关键，由于大鼠活泼好动，喜欢撕咬，一般手术置管后导管容易被撕裂、咬断，故注意严防感染，加强局布消毒，并防止凝血堵管，定期使用肝素钠通管。
豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的分离、培养及其鉴定
目的` 探索豚鼠膀胱Cajal样问质细胞的原代培养方法.方法 颈部脱臼法处死豚鼠,无菌条件下分离出膀胱肌组织制备成肌条.采用V型胶原酶酶解法分离细胞,将细胞悬液接种于含干细胞因子的细胞培养基中培养,隔日换液.用酪氨酸蛋白激酶受体特异性抗体标记细胞,证实细胞类型.结果 培养后的Cajal样间质细胞保持其固有特征,可见胞体为梭形且胞体两极有两个细长突起,该类细胞酪氨酸蛋白激酶受体抗体荧光染色阳性证实细胞培养成功.结论 用V型胶原酶消化法可获得成年豚鼠膀胱Cajal样问质细胞,并在体外条件下生长,可用于Cajal样间质细胞的电生理学研究.
作 者：Wang Qian 王勤章 Ding Guofu 李维仁 Wang Wenxiao 王江平Li Yinglong Wang Qian Wang Qinzhang Ding Guofu Li Weiren Wang Wenxiao Wang Jiangping Li Yinglong 作者单位：新疆石河子大学医学院一附院泌尿外科,新疆石河子,83 刊 名：现代泌尿外科杂志 ISTIC英文刊名：JOURNAL OF MODERN UROLOGY 年，卷(期)：2008 13(4) 分类号：Q813.11 关键词：干细胞因子 V型胶原酶 酪氨酸蛋白激酶受体 Cajal样间质细胞葛根异黄酮的快速分离检测方法研究
以SDS-正丁醇-正庚烷-水组成的微乳体系作为展开剂,通过聚酰胺薄层层析,探讨不同类型微乳液对葛根异黄酮分离检测效果的影响.结果表明,选择含水量为70%的'微乳液作为展开剂,分离效果明显,一次检测出12个黄酮化合物;与以三氯甲烷-甲醇-水(7:2.5:0.25)为展开剂的硅胶薄层相比,微乳薄层色谱对葛根异黄酮的检测效果和灵敏度显著提高,为实验研究中常规检测提供了简便快捷的方法.
作 者：张亚梅 王俊儒 张普照 彭菊艳 ZHANG Ya-mei WANG Jun-ru ZHANG Pu-zhao PENG Ju-yan 作者单位：西北农林科技大学,生命科学学院,陕西,杨陵,712100 刊 名：西北植物学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA 年，卷(期)：2006 26(4) 分类号：Q946-33 Q949.751.9 关键词：葛根异黄酮 分离鉴定 薄层色谱 微乳液