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类人胶原蛋白基因工程菌高密度发酵过程控制
目的优化基因工程菌Escherichia coli BL 21生产人源型胶原蛋白的.高密度发酵工艺.方法建立一套以溶解氧浓度和比生长速率为中心的控制策略,采用溶氧反馈或pH反馈调节补料速度.结果OD600可达150,胶原蛋白的表达量为9g/L.结论20%～30%饱和度的溶解氧和0.1～0.2 h-1的比生长速率有利于细胞生长和产物表达,其与降低乙酸等有害代谢副产物的积累密切相关.
作 者：马晓轩 范代娣 骆艳娥 米钰 MA Xiao-xuan FAN Dai-di LUO Yan-e MI Yu 作者单位：西北大学,化工学院,陕西,西安,710069 刊 名：西北大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF NORTHWEST UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)： 36(2) 分类号：Q93 关键词：重组大肠杆菌 高密度发酵 乙酸 类人胶原蛋白重组类人胶原蛋白工程菌补料发酵过程建模
对产类人胶原蛋白的重组大肠杆菌Escherichia coli(E.coli)的批式和分批-补料培养动力学进行了研究.通过检测发酵过程的基质浓度、菌体量和产物浓度,建立了一组反映发酵的.动力学模型,并考虑了非工程菌存在的影响,分析了细胞生长、底物消耗、基因工程产物生成的过程,结果显示该动力学模型可以很好地拟合发酵过程.
作 者：米钰 花秀夫 范代娣 张兮 MI Yu HUA Xiu-fu FAN Dai-di ZHANG Xi 作者单位：西北大学化工学院,西安,710069 刊 名：中国生物工程杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2006 26(4) 分类号：Q815 关键词：动力学 发酵 胶原蛋白类人胶原蛋白工程菌质粒稳定性研究
目的. 研究基因重组大肠杆菌补料分批发酵生产类人胶原蛋白过程中质粒稳定性.方法 通过平板复制法,观察质粒稳定性在不同生长周期、卡那霉素浓度和不同比生长速率中的变化.结果 质粒稳定性受生长周期、卡那霉素和比生长速率的影响.在μ为0.15、卡那霉素浓度为0.005 g/L的情况下,工程菌生产效率最理想.结论 通过控制发酵过程中的质粒稳定性可以有效地提高菌体产量和目标蛋白产量.
作 者：郑文超 范代娣 米钰 马晓轩 骆艳娥 惠俊锋 ZHENG Wen-chao FAN Dai-di MI Yu MA Xiao-xuan LUO Yan-e HUI Jun-feng 作者单位：郑文超,ZHENG Wen-chao(西北大学生命科学学院,陕西,西安,710069)范代娣,米钰,马晓轩,骆艳娥,惠俊锋,FAN Dai-di,MI Yu,MA Xiao-xuan,LUO Yan-e,HUI Jun-feng(西北大学,化工学院,陕西,西安,710069)
刊 名：西北大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF NORTHWEST UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)： 36(6) 分类号：Q939 关键词：类人胶原蛋白 补料分批发酵 质粒稳定性 生长周期 比生长速率周期操作对重组大肠杆菌高密度发酵表达类人胶原蛋白的影响
采用补料-分批式发酵,研究了4种不同间歇周期补氮操作对细胞生长和类人胶原蛋白表达的影响,以及发酵过程中细胞质粒稳定性、细胞菌落形成能力和乙酸生成量的变化.结果表明,在每隔10 min连续补加36 mL补料氮溶液(22 s完成补加操作)的周期操作下,细胞质粒稳定性明显提高,细胞菌落形成能力下降较小,乙酸生成量低,仅0.7 g/L,最终细胞密度为84 g/L,类人胶原蛋白表达量可达到14 g/L,在4种操作方式中最高.
作 者：马晓轩 范代娣 刘树文 骆艳娥 MA Xiao-xuan FAN Dai-di LIU Shu-wen LUO Yan-e 作者单位：马晓轩,范代娣,骆艳娥,MA Xiao-xuan,FAN Dai-di,LUO Yan-e(西北大学,化工学院,陕西,西安,710069)刘树文,LIU Shu-wen(西北农林科技大学,葡萄酒学院,陕西,杨凌,712100)
刊 名：西北农林科技大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF NORTHWEST SCI-TECH UNIVERSITY OF AGRICULTURE AND FORESTRY（NATURAL SCIENCE EDITION） 年，卷(期)：2006 34(3) 分类号：Q939 关键词：重组大肠杆菌 高密度发酵 类人胶原蛋白 周期操作 质粒稳定性 细胞活性牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定
肠激酶(enterokinase, EK)是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶.根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA,测序正确后将其插入甲醇酵母分泌型载体pPICZαA,得到重组质粒pPICZαA/EKL,重组载体经线性化后转化Pichia pastoris SMD 1168H,筛选得到重组牛肠激酶轻链工程菌.分别对重组酵母工程菌进行高密度发酵、 rEKL (recombinant enterokinase light chain, rEKL) 纯化、 N端序列测定、生物学活性鉴定等研究工作.结果表明,发酵上清中rEKL含量高,纯化的rEKL专一性强、无其他杂酶活性、 N端15个氨基酸序列与文献报道一致. 图5 参17
作 者：李德华 苟兴华 胡海洋 徐琦 刘忠荣 吴洽庆 余晓东 LI Dehua GOU Xinghua HU Haiyang XU Qi LIU Zhongrong WU Qiaqing YU Xiaodong 作者单位：李德华,LI Dehua(重庆师范大学生命科学院,重庆,400047;成都地奥制药集团有限公司,成都,610041)苟兴华,胡海洋,刘忠荣,GOU Xinghua,HU Haiyang,LIU Zhongrong(成都地奥制药集团有限公司,成都,610041)
徐琦,XU Qi(成都地奥制药集团有限公司,成都,610041;四川大学化工学院,成都,610065)
吴洽庆,WU Qiaqing(成都地奥制药集团有限公司,成都,610041;中国科学院成都生物研究所,成都,610041)
余晓东,YU Xiaodong(重庆师范大学生命科学院,重庆,400047)
刊 名：应用与环境生物学报 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF APPLIED & ENVIRONMENTAL BIOLOGY 年，卷(期)： 12(6) 分类号：Q78 关键词：肠激酶(enterokinase,EK) 甲醇酵母(Pichia pastoris) 高密度发酵4种金属离子亲和层析纯化重组类人胶原蛋白的效果比较
对利用金属离子亲和层析纯化重组类人胶原蛋白过程中使用的金属离子进行了比较,从而对分离纯化的条件进行优化.在相同实验条件下,用4种金属离子柱分离纯化目的蛋白.结果显示,经4种金属离子柱纯化后镍柱的总蛋白收获率最高,铜柱与锌柱居中,钙柱最低;而柱保留时间则为锌柱最高(12.38 min),钙柱最低(8.25 min);钙柱洗脱时所需咪唑解离初始浓度最低(100 mmol/L),锌柱最高(200 mmol/L);对SDS-PAGE电泳图进行分析得纯化后类人胶原蛋白的纯度分别为:镍柱82.8%,铜柱83.4%,锌柱96.2%,钙柱94.3%.由此可见锌柱对目标蛋白的亲和力最高,且纯化后类人胶原蛋白的'纯度也最高.因此,确定锌离子作为亲和层析纯化重组类人胶原蛋白的金属离子.
作 者：王晓军 范代娣 WANG Xiao-jun FAN Dai-di 作者单位：王晓军,WANG Xiao-jun(西安工程大学,环化学院,陕西,西安,710048)范代娣,FAN Dai-di(西北大学,化工学院,陕西,西安,710069)
刊 名：应用化工 ISTIC英文刊名：APPLIED CHEMICAL INDUSTRY 年，卷(期)：2009 38(6) 分类号：O636 关键词：重组类人胶原蛋白 金属螯合亲和层析 金属离子 纯化