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mRNA差异显示技术及其用于动物胚胎早期发育基因研究的进展
真核生物mRNA差异显示技术的创立及对该技术的一系列改进,为研究胚胎发育过程中有关基因的差异表达,以及有关基因的分子克隆提供了有效工具.本文概述了差显技术的'原理及其在动物早期胚胎发育基因方面的研究进展.
作 者：李拥军 敖红 孙桂金 赵有璋 LI Yong-jun AO Hong SUN Gui-jin ZHAO You-zhang 作者单位：李拥军,LI Yong-jun(甘肃农业大学动物科学与技术学院,甘肃,兰州,730070;中国农科院畜牧所,北京,100094;扬州大学动物科学与技术学院,江苏,扬州,225009)敖红,AO Hong(中国农科院畜牧所,北京,100094)
孙桂金,SUN Gui-jin(中国农科院畜牧所,北京,100094;山东农业大学动物科技学院,山东,泰安,271018)
赵有璋,ZHAO You-zhang(甘肃农业大学动物科学与技术学院,甘肃,兰州,730070)
刊 名：中国畜牧杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE 年，卷(期)： 42(5) 分类号：Q954.4 关键词：畜牧、兽医科学基础学科 mRNA差异显示技术 综述 胚胎发育 基因用单胚mRNA差异显示技术筛选山羊早期胚胎发育相关基因
用单胚构建的mRNA差异显示技术,对体外培养的山羊早期2、4、8～16细胞期胚胎的基因表达进行研究,并选择1条在2细胞期胚胎特异表达的`条带进行分析.结果表明: 该片段与人类肽基精氨酸脱亚胺酶基因具有83%的同源性.该基因通过对组蛋白和细胞骨架蛋白翻译后的修饰作用,对早期胚胎发育过程中基因转录和表达的调控起着重要作用,是羊早期胚胎发育过程中的重要影响因子.
作 者：李拥军 敖红 孙桂金 LI Yong-jun AO Hong SUN Gui-jin 作者单位：李拥军,LI Yong-jun(扬州大学,动物科学与技术学院,江苏,扬州,225009;中国农业科学院,畜牧研究所,北京,100094)敖红,AO Hong(中国农业科学院,畜牧研究所,北京,100094)
孙桂金,SUN Gui-jin(中国农业科学院,畜牧研究所,北京,100094;山东农业大学,动物科学与技术学院,山东,泰安,271018)
刊 名：扬州大学学报（农业与生命科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF YANGZHOU UNIVERSITY(AGRICULTURAL AND LIFE SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2006 27(3) 分类号：Q789 关键词：山羊 胚胎 单胚mRNA差异显示技术 基因mRNA差异显示方法研究进展
[关键词] DD-PCR 骨科学 研究健康网讯:
马庆军 100083 北京医科大学第三医院骨科党耕町 100083 北京医科大学第三医院骨科
宋国立 美国加州大学圣地亚哥分校骨科与生物工程系
哺乳动物细胞约有100?000个不同的基因，在一定时间、空间中仅有10％～15％的基因表达，这种表达受到严格调控［1］。运用mRNA 差异显示（differential display,DD）方法［2］，可将不同细胞类型或同一细胞在不同环境下表达的基因进行比较，从分子生物学水平上提供信息，这对理解细胞的生命过程极有帮助。该技术一经问世，立即得到广泛应用，但同时也遇到许多问题，所以Debouck［3］曾对该方法提出质疑。现将DD的研究进展简要综述如下。
一、DD方法基本原理
DD的基本原理是将具有可比性的细胞在某一条件下可表达的mRNA 群体通过逆转录方法变成相应的cDNA 群体，以此为模板，利用一对特殊引物，即3?anchor 引物和5?arbitrary引物，在一定条件下进行PCR扩增，得到与mRNA相对应的“标签”（tags），然后用变性聚丙烯酰胺测序胶分析其差别，将有差别的基因克隆化，进一步分析其结构与功能。DD依赖三种技术：（1）mRNA逆转录技术；（2）以特定引物进行的`PCR技术；（3）DNA测序胶电泳技术。
二、DD方法的优点及其应用
用某一方法来寻找mRNA表达的差异，至少要满足下列要求：（1）在一定时间、空间里，每一个细胞约有15 000种mRNA表达，其中除少数属高丰度表达外，大量的属于低丰度表达，即要求使用的方法足以显示低丰度mRNA；（2）重复性要好；（3）实验过程中能够步步验证比较（side-by-side comparison）；（4）得到的产物能代表相应的mRNAs或cDNAs，并能由此找到相应的cDNA 序列；（5）省时，简便易行。
既往对mRNA的比较研究中多用减数杂交方法［4］（subtraction hybridization），该方法灵敏，可显示低丰度RNA，但是步骤复杂，需时较长，而且在得到最终结果前无法步步验证对照比较，故不易重复，并且需要大量的RNA作起始研究材料。这一点对RNA来源不易者（如手术活检标本）极不利［5，6］。
DD的优点在于：（1）仅需0.2 μg总RNA作为起始材料；（2）可同时分析多组样品；（3）敏感性高，可检出低丰度mRNA；（4）实验周期短，约8天即可完成［7］，便于重复；（5）最突出的优点是实验过程中可步步验证比较。可简单地将DD的特点概括为“3SRV”，即“Simplicity，Sensitivity，Speed，Reproducibility，Versatility”。
DD方法因有上述优点，被广泛应用。例如：Musholt等［8］应用DD方法对手术切下的髓样甲状腺癌标本与局部转移的淋巴结进行了比较，发现了两个新的表达基因MDF-1和MDF-2，并认为这两个基因在髓样甲状腺癌的进展与转移中起了重要作用；Zuo等［9］研究溃疡
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mRNA差异显示技术及其在园艺植物上的应用(综述)
mRNA差异显示技术是鉴别基因差异表达方法之一,已在生物技术相关领域中广泛应用.本文介绍mRNA差异显示技术的基本原理及主要优缺点,较详细地综述了该技术在园艺植物生物技术方面的'最新应用状况及取得的研究结果.
作 者：刘凯 曾继吾 夏瑞 黄永红 陈金印 易干军 LIU Kai ZENG Ji-wu XIA Rui HUANG Yong-hong CHEN Jin-yin YI Gan-jun 作者单位：刘凯,LIU Kai(广东省农业科学院,果树研究所,广东,广州,510640;江西农业大学,农学院,江西,南昌,330045)曾继吾,夏瑞,黄永红,易干军,ZENG Ji-wu,XIA Rui,HUANG Yong-hong,YI Gan-jun(广东省农业科学院,果树研究所,广东,广州,510640)
陈金印,CHEN Jin-yin(江西农业大学,农学院,江西,南昌,330045)
刊 名：亚热带植物科学 英文刊名：SUBTROPICAL PLANT SCIENCE 年，卷(期)： 38(1) 分类号：Q-33 S6 关键词：mRNA差异显示技术 园艺植物几种基因差异表达筛选技术在动物发育与繁殖中的最新进展
抑制性消减杂交(SSH)、DNA芯片和基因表达系列分析(SAGE)技术都是高效鉴别不同细胞群之间差异表达基因的方法.作者对这3种方法在动物发育与繁殖领域中的.最新应用进展作了简要阐述.
作 者：肖朝庭 储明星 傅衍 XIAO Chao-ting CHU Ming-xing FU yan 作者单位：肖朝庭,傅衍,XIAO Chao-ting,FU yan(浙江大学动物科学学院,杭州,310029)储明星,CHU Ming-xing(中国农业科学院畜牧研究所,北京,100094)
刊 名：中国畜牧兽医 ISTIC PKU英文刊名：CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE 年，卷(期)： 33(4) 分类号：Q786 关键词：SSH DNA微阵列 SAGE 动物发育与繁殖 差异表达基因基因表达谱差异显示技术及其在植物对害虫取食诱导反应研究中的应用(综述)
基因表达谱差异显示技术是最近兴起的研究同种细胞在不同状态下基因表达差异的一种有效手段.目前已成功地应用于植物对害虫取食诱导防御的分子机制和发掘植物内源抗虫基因的研究领域,并显示出独特的`优势.本文仅就植物被害虫取食前后基因表达谱差异研究中所涉及的技术、原理、问题和取得的进展进行综述和展望.
作 者：韦朝领 高香凤 江昌俊 叶爱华 WEI Chao-ling GAO Xiang-feng JIANG Chang-jun YE Ai-hua 作者单位：韦朝领,WEI Chao-ling(安徽农业大学资源与环境学院,合肥,230036)高香凤,江昌俊,叶爱华,GAO Xiang-feng,JIANG Chang-jun,YE Ai-hua(安徽农业大学农业部茶叶生物技术重点开放实验室,合肥,230036)
刊 名：安徽农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)：2006 33(1) 分类号：Q789 关键词：基因表达谱差异显示 植物-害虫相互作用 抗虫性 取食诱导