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HBV前S2蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定
目的`克隆表达HBV前S2蛋白,用纯化的重组蛋白GST-S2免疫BALB/C小鼠,通过杂交瘤技术制备抗HBV前S2蛋白的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性.方法利用含双拷贝乙肝病毒adw2亚型基因全序列的质粒pEcob6,经PCR方法扩增出HBV前S2片段,在GST表达系统中表达,表达产物用谷胱甘肽亲和层析纯化后,用于免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗前S2蛋白的mAb,采用间接ELISA方法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA方法鉴定mAb相对亲和力.结果获得一株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞7A6;相对亲和力均在107以上.Western blot显示该株mAb能特异识别重组前S2蛋白.结论成功地制备出抗HBV前S2蛋白的一株mAb.
作 者：赖梅梅 王雪梅 张君 蔡雪飞 郑健 黄爱龙 Lai Meimei Wang Xuemei Zhang Jun Cai Xuefei Zheng Jian Huang Ailong 作者单位：重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所,感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆,400016 刊 名：生物技术通报 PKU英文刊名：BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年，卷(期)： “”(3) 分类号：Q5 关键词：乙肝病毒 前S2蛋白 单克隆抗体 生物学特性邻氯青霉素单克隆抗体的制备及特性鉴定
采用碳化二亚胺法,将邻氯青霉素(cloxacillin)与牛血清白蛋白偶联制备免疫原,免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术获得了一株能稳定分泌抗邻氯青霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株2H8-B1-F4.间接ELISA方法测定,抗体亚类为IgG1,其细胞上清抗体效价为1:1000,腹水效价为1:4×105.与其结构类似物苯唑青霉素、双氯青霉素的.交叉反应率为21.3%和19.6%,和氨苄青霉素、羟氨苄青霉素和苄青霉素无交叉反应.体外传代培养和冻存复苏后抗体分泌稳定.为进一步研制检测邻氯青霉素的ELISA试剂盒奠定基础.
作 者：王琳 齐孟文 冯才伟 孟丽丽 WANG Lin QI Meng-wen FENG Cai-wei MENG Li-li 作者单位：中国农业大学生物物理系,北京,100094 刊 名：中国生物工程杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 26(2) 分类号：Q819 关键词：β-内酰胺抗生素 双氯青霉素 单克隆抗体磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的制备及特性鉴定
采用重氮化法合成磺胺二甲嘧啶(SM2)-人血清白蛋白(HSA)免疫抗原和SM2-卵清白蛋白(OVA)包被抗原.经紫外光谱扫描法确认SM2与载体蛋白偶联成功;经计算SM2与HSA、OVA的结合比分别为9:1和15:1.利用杂交瘤技术和有限稀释法经过5次亚克隆,得到三株特异性稳定分泌SM2抗体的.杂交瘤细胞,经鉴定该单克隆抗体免疫球蛋白亚类为IgG1,为入链,分子量为162 Ku,染色体数目90条左右,亲和常数为6.1×1012 M-1.与其他四种磺胺药和两种载体蛋白HSA、OVA均无交叉反应.
作 者：丁良君 李继昌 周艳君 付锐 霍贵成 张东玲 DING Liang-jun LI Ji-chang ZHOU Yan-jun FU Rui HUO Gui-cheng ZHANG Dong-ling 作者单位：丁良君,李继昌,霍贵成,张东玲,DING Liang-jun,LI Ji-chang,HUO Gui-cheng,ZHANG Dong-ling(东北农业大学,动物医学院,黑龙江,哈尔滨,150030)周艳君,ZHOU Yan-jun(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001)
付锐,FU Rui(伊春市金山屯区林业医院,黑龙江,伊春,1500263)
刊 名：中国预防兽医学报 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE 年，卷(期)：2006 28(6) 分类号：Q785 关键词：磺胺二甲嘧啶 单克隆抗体 酶联免疫吸附实验抗果蝇Dnop5蛋白抗体的制备及其特性鉴定
目的:制备兔抗果蝇Dnop5蛋白的抗体,并进行特性鉴定.方法:以RT-PCR扩增Dnop5的全长cDNA并克隆入pET28a(+)表达载体中,表达并纯化Dnop5-His融合蛋白.用纯化的Dnop5-His融合蛋白免疫家兔,制备抗Dnop5的抗体,并用His亲和层析法进行纯化.采用Western blot法和免疫组化染色法鉴定该抗体的特异性及生物学活性.结果:表达的Dnop5-His蛋白以包涵体的形式存在,用His亲和层析法分离纯化后得到较纯的Dnop5-His融合蛋白,以纯化的Dnop5-His免疫家兔制备的`兔抗Dnop5的抗体,经Western blot分析显示:该抗体可与果蝇的胚胎、幼虫、蛹及成虫组织中表达的Dnop5特异性结合.结论:获得具有良好特异性的兔抗dnop5抗体,为进一步研究Dnop5的功能奠定了基础.
作 者：袁榴娣 张燕 万永奇 丁洁 YUAN Liu-di ZHANG Yan WAN Yong-qi DING Jie 作者单位：东南大学基础医学院,教育部发育与疾病相关基因重点实验室,江苏,南京,210009 刊 名：细胞与分子免疫学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY 年，卷(期)： 22(5) 分类号：Q786 关键词：果蝇 Nop/Sik家族 Dnop5基因 原核表达 抗体制备抗IBDV VP2单克隆抗体制备及其免疫学鉴定
采用不连续蔗糖密度梯度离心法纯化的鸡传染性法氏囊病病毒弱毒Gt株,并与Tj强毒株共同免疫BALB/c小鼠.利用淋巴细胞杂交瘤技术,取其脾细胞与SP2/0 骨髓瘤细胞进行融合, 经过3次筛选克隆, 获得8株具有分泌抗IBDV抗体的杂交瘤细胞系,并对8株单抗进行了分子生物学及免疫学方面的鉴定.间接ELISA显示获得的'8株单抗只与IBDV有特异性的反应,Western-blotting表明,部分单抗能够特异地与Sf9细胞表达的VP2蛋白反应;中和试验表明8株单抗均具有中和活性,而且有3株中和效价在26以上.研究推测,8株单抗中有2株针对的表位为构象依赖性,其余6株单抗所针对的为线性中和性表位.
作 者：程宇 高宏雷 高玉龙 简子健 余嘉玲 王晓燕 王笑梅 CHENG Yu GAO Hong-lei GAO Yu-long JIAN Zi-jian YU Jia-ling WANG Xiao-yan WANG Xiao-mei 作者单位：程宇,CHENG Yu(中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001;新疆农业大学,动物医学院,乌鲁木齐,830052)高宏雷,高玉龙,王晓燕,王笑梅,GAO Hong-lei,GAO Yu-long,WANG Xiao-yan,WANG Xiao-mei(中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001)
简子健,余嘉玲,JIAN Zi-jian,YU Jia-ling(新疆农业大学,动物医学院,乌鲁木齐,830052)
刊 名：新疆农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF XINJIANG AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)：2006 29(2) 分类号：Q785 关键词：传染性法氏囊病病毒 单克隆抗体 中和活性