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核受体超家族及其酵母双杂交检测技术
摘要：环境污染物的内分泌干扰问题近年来引起了极大的.关注,大量研究证实:核受体是内分泌干扰的重要作用位点.论文在总结国内外相关研究基础上,对生物体内核受体超家族的组成、结构特征、作用模式进行了概括总结;对环境内分泌干扰物干扰核受体超家族最新研究进展给予了评述;对酵母双杂交检测技术的原理及其在核受体超家族和环境内分泌干扰效应研究中的应用进行了探讨,指出应将酵母双杂交检测技术与核受体超家族研究相结合,建立成组重组核受体基因双杂交酵母体系,应用于多种内分泌干扰效应和作用机制的系统研究.作 者：李剑 饶凯锋 马梅 王子健 LI Jian RAO Kai-feng MA Mei WANG Zi-jian 作者单位：李剑,LI Jian(中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室,北京,100085;北京师范大学水科学研究院,北京,100875)饶凯锋,马梅,王子健,RAO Kai-feng,MA Mei,WANG Zi-jian(中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室,北京,100085)
期 刊：生态毒理学报 ISTIC Journal：ASIAN JOURNAL OF ECOTOXICOLOG 年，卷(期)：, 3(6) 分类号：X524 关键词：核受体超家族 酵母双杂交 环境内分泌干扰物酵母双杂交技术研究进展
酵母双杂交技术是一种有效的真核活细胞内研究方法,在蛋白质相互作用的研究方面得到了广泛的应用并取得了许多有价值的重要发现.作为一个完整的实验系统,它自建立以来经过了不断的`改进与完善,不仅进一步提高了实验结果的可靠性与精确性,而且在此基础上又发展了反向双杂交,三杂交及核外双杂交等多项技术.这些都将对功能基因组学和蛋白质组学的研究起到促进作用.
作 者：张迪 霍克克 顾科隆 赵翔 李育阳 作者单位：复旦大学遗传学研究所基因工程国家重点实验室,上海,33 刊 名：高技术通讯 ISTIC EI PKU英文刊名：HIGH TECHNOLOGY LETTERS 年，卷(期)： 10(3) 分类号：Q93 关键词：酵母双杂交筛选与甲状旁腺素1型受体相互作用的蛋白
目的:采用Clontech公司第3套酵母双杂交系统,筛选与甲状旁腺素1型受体(PTH1R)相互作用的蛋白.方法:将全长PTH1R基因克隆到载体pGBKT7作为诱饵,用LiAc介导将诱饵蛋白质粒pGBKT7-PTH1R和人肾cDNA文库质粒转化到酵母菌AH109中,检测Mell报告基因的表达,并进行相互作用的验证.结果:测序和相互作用验证结果表明SNAPIN在酵母系统中能特异地与PTHH1R相互作用;根据对SNAPIN基因的功能分析,其可能与细胞内钙稳态的调控有关.结论:为进一步研究PTH1R促进骨肉瘤进展的'机制提供了一定的线索.
作 者：刘俊丽 冯凯 路浩军 秦亚亚 张建中 LIU Jun-Li FENG Kai LU Hao-Jun QIN Ya-Ya ZHANG Jian-Zhong 作者单位：解放军306医院,病理实验科,北京,100101 刊 名：生物技术通讯 ISTIC英文刊名：LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 21(2) 分类号：Q78 关键词：甲状旁腺素1型受体 酵母双杂交 相互作用 SNAPIN用酵母双杂交检测BAR与PDZ结构域的相互作用
用酵母双杂交系统探索PICK1分子中BAR结构域与PDZ结构域的相互作用.分别构建了pGAD-PDZ和pGBK-BAR重组子,共转入酵母细胞后,涂布于SD(Leu-,Trp-,His-)固体平板培养基,经滤纸复印和显色反应,在8 h内观察到只有pGAD-PDZ/pGBK-BAR的'表达产物呈阳性,而其它对照pGADT7/pGBKT7、pGAD-PDZ/pGBKT7和pGADT7/pGBK-BAR均呈阴性反应,说明BAR与PDZ结构域具有相互作用.
作 者：肖虹 袁静明 石亚伟 XIAO Hong YUAN Jing-ming SHI Ya-wei 作者单位：山西大学,生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室,山西,太原,030006 刊 名：山西大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SHANXI UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)： 29(4) 分类号：Q814 关键词：PICK1 BAR结构域 PDZ结构域 酵母双杂交系统 相互作用应用酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白的研究
目的 应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白.方法 用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的.酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性克隆,提取酵母质粒后转化大肠埃希菌(DH5α)并经氨苄西林抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,进行酶切鉴定及序列测定,并进行生物信息学分析.结果 应用酵母双杂交技术筛选出阳性克隆29个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,最后得到19个克隆基因,编码14种已知蛋白和一种未知功能蛋白.初步发现铁蛋白与IFNβ具有结合作用.结论 应用酵母双杂交技术筛选出多种与IFNβ具有结合作用的蛋白.
作 者：钟彦伟 成军 郭风劲 曲建慧 纪冬 程勇前 李晓东 郭江 戴久增 王琳 徐东平ZHONG Yan-wei CHENG Jun GUO Feng-jin QU Jian-hui JI Dong CHENG Yong-qian LI Xiao-dong GUO Jiang DAI Jiu-zeng WANG Lin XU Dong-ping 作者单位：钟彦伟,曲建慧,纪冬,程勇前,李晓东,戴久增,王琳,徐东平,ZHONG Yan-wei,QU Jian-hui,JI Dong,CHENG Yong-qian,LI Xiao-dong,DAI Jiu-zeng,WANG Lin,XU Dong-ping(100039,北京,解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室)成军,郭江,CHENG Jun,GUO Jiang(北京地坛医院传染病研究所)
郭风劲,GUO Feng-jin(重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室)
刊 名：中华实验和临床病毒学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL VIROLOGY 年，卷(期)：2006 20(4) 分类号：Q5 关键词：酵母菌 杂交 干扰素β 结合蛋白朊蛋白(prp23-231)酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用的检测
PCR 扩增小鼠朊蛋白(prp23-231)基因,克隆入诱饵载体pSos,将重组质粒与对照质粒共转化酵母菌cdc25H,成功地构建了小鼠朊蛋白(prp23-231)酵母双杂交诱饵载体PSos-prp23-231,并证实该段基因表达的.蛋白对酵母菌cdc25H既无毒性,也没有自激活作用.
作 者：徐静 万家余 高宏伟 XU Jing WAN Jia-yu GAO Hong-wei 作者单位：徐静,XU Jing(吉林大学,畜牧兽医学院,吉林,长春,130062;军事医学科学院,军事兽医研究所,吉林,长春,130062)万家余,高宏伟,WAN Jia-yu,GAO Hong-wei(军事医学科学院,军事兽医研究所,吉林,长春,130062)
刊 名：江西农业学报 ISTIC英文刊名：ACTA AGRICULTURAE JIANGXI 年，卷(期)：2008 20(4) 分类号：Q782 关键词：朊蛋白 酵母双杂交系统 诱饵载体 自激活